高转移肺癌细胞株95 D中特异表达的C3orf1基因分析

目的 进一步了解肺癌转移的分子机制,筛选高转移肺癌中差异表达的基因。方法 利用荧光差异显示技术（DD—PCR）获得差异片段,对这些片段进行克隆和序列分析。通过在GenBank中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因。利用定量PCR检测验证该基因表达的差异性,并对该基因的结构进行预测。结果 通过DD—PCR得到9个差异片段,其中一个片段对应于C3orf1基因。定量PCR验证的结果表明,C3orf1基因在高转移肺癌中的表达量显著高于其他被测试的5种肿瘤细胞。该基因的读码框长858bp,编码285个氨基酸,分子量约32200。蛋白质结构预测分析发现,该基因含有7个类似表皮生长信号区,N端有一含有24个氨基酸的信号肽,并且还可能有3个2S-2Fe铁氧化还原蛋白铁硫结合信号区,2个维持自身静态平衡的VWFC信号区和2个硫解酶活性区。结论 C3orf1基因在高转移肺癌中异常表达,可能是分泌型的生长因子类蛋白,刺激细胞的生长。     

肝癌的基因治疗:瓶颈与前景

基因治疗是以导入外源遗传物质,达到治疗疾病的一种方法。这包括纠正取代体内细胞基因的缺陷或通过导入某种基因(或遗传物质)并使它过量表达而实现治病的目的。对于遗传病,基因治疗将成为极为有效的治疗手段。但对于其它疾病,如恶性肿瘤,基因治疗将可能成为外科手术、放疗、化疗外的新武器。它的作用不是取代其它的治疗手段,它的目标应该是     

转化医学与肿瘤防治

转化或转换医学(Translational Medicine)是近年来国际医学健康领域突出强调的新理念,与个性化医学(Personalized Medicine)、可预测性医学和数字化医学等一同构成包括系统病理学、系统药物学、系统诊断与综合治疗在内的系统医学体系.     

DNA甲基化及其在肿瘤分子诊断中的前景

DNA甲基化是研究最为深入的表观遗传学机制。该机制的异化可导致基因表达的异常及基因组稳定性的降低，继而促进肿瘤发生和发展。启动子CpG岛的高甲基化已被认为是与遗传性缺陷同等重要的、造成抑癌基因在肿瘤中失活的分子生物学机制。虽然有关DNA甲基化肿瘤特异性异化谱式信息仍极有限，但其在肿瘤临床诊断和预后中的巨大潜力已开始得到重视。现结合我们近3年的工作和该领域的最新进展，对DNA甲基化作为肿瘤临床诊断标志物的应用前景进行评估。     

基于“伏邪”说的肝复安治疗慢性乙型病毒性肝炎患者铁代谢异常临床观察

目的观察基于"伏邪"说的肝复安治疗慢性乙型病毒性肝炎(简称慢乙肝)患者铁代谢异常的临床疗效。方法将102例铁代谢异常相关性肝病(慢乙肝及肝硬化)患者分为治疗组(48例)与对照组(54例)。治疗组予中药"肝复安"辨证治疗,对照组予西医常规药物(抗病毒、保肝药)治疗。两组疗程均为36个月,观察肝脏铁质沉积疗效,比较血清铁代谢指标、肝功能、病毒及相关免疫指标等的变化情况。结果 1组间肝脏铁沉积疗效比较,第24个月、第36个月差异均有统计学意义,治疗组优于对照组(P0.05)。2组间治疗后比较,血清铁(SI)、血清铁蛋白(SF)浓度及异常率差异有统计学意义,治疗组较对照组降低程度更显著、指标异常率更低(P0.05)。组间治疗后比较,转铁蛋白(TRF)浓度及异常率差异有统计学意义,治疗组较对照组升高程度更显著、指标异常率更低(P0.05)。3组间治疗后比较,治疗组丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平较对照组降低更为明显,差异有统计学意义(P0.05);乙肝表面抗原(HBs Ag)浓度差异有统计学意义,治疗组较对照组降低程度更显著(P0.05);CD3~+水平及异常率差异有统计学意义,治疗组较对照组升高程度更显著、指标异常率更低(P0.05);CD4~+/CD8~+异常率差异有统计学意义(P0.05)。结论基于"伏邪"说的肝复安治疗慢乙肝患者铁代谢异常,能有效纠正铁代谢异常,恢复免疫功能,抑制病毒复制,减轻肝脏损伤。     

稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析

目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆。选取高表达EG-FRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性。结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex。用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10-5。Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFR-vⅢex特异结合。结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达,以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清。     

曲美替尼在卵巢癌中对PAX8的表达作用

目的 探究MEK抑制剂—曲美替尼在卵巢癌中对PAX8表达的作用。 方法 应用基因富集分析(GSEA)检测卵巢癌细胞经曲美替尼处理后相关基因表达的差异,蛋白免疫印迹法、免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测曲美替尼对卵巢癌细胞PAX8蛋白表达和PAX8 mRNA的影响;结晶紫染色法检测曲美替尼对卵巢癌细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR和CCK8实验检测干扰KRAS突变卵巢癌细胞ELK1基因后PAX8表达及细胞增殖的变化。 结果 GSEA结果显示,曲美替尼使卵巢癌细胞的KRAS基因和ELK1基因表达下调(P<0.01);实时荧光定量PCR结果显示,曲美替尼能抑制KRAS突变卵巢癌细胞中PAX8的转录(P<0.001);结晶紫染色法结果显示,曲美替尼处理后的KRAS突变卵巢癌细胞的增殖能力降低;蛋白免疫印迹法结果显示,曲美替尼能抑制KRAS突变卵巢癌细胞PAX8基因和ELK1基因表达(P<0.001),干扰KRAS突变卵巢癌细胞ELK1基因能抑制PAX8基因的表达(P<0.001);CCK8结果显示,干扰ELK1基因表达可抑制KRAS突变卵巢癌细胞增殖(P<0.05)。 结论 曲美替尼在KRAS突变的卵巢癌中通过ELK1抑制PAX8表达及细胞增殖。     

Dickkopf-1时间分辨免疫荧光分析方法的建立及其在肺癌诊断中的应用

目的 建立Dickkopf-1(DKK-1)时间分辨免疫荧光分析(TR-IFMA)方法,并评价其在肺癌诊断和病理分期中的价值.方法 用双抗夹心原理建立DKK-1 TR-IFMA,并对其灵敏度、批内、批间差异和准确性等各项指标进行考核.同时用以测定212例肺癌、72例肺良性疾病患者和120名健康人血清DKK-1含量,以分析血清DKK-1水平与肺癌不同临床病理特性的相关性.结果 DKK-1TR-IFMA的稳定性好,线性宽,其检测灵敏度为0.08μg/L,批内和批间变异系数均<6.5%,与商业ELISA试剂盒相关性好(r=0.972,P=0.01).肺癌组血清DKK-1水平[31.93(79.47～18.03)μg/L]显著高于肺良性疾病组[15.25(18.41～11.49)μg/L]和正常对照组[13.90(16.91～11.02)μg/L],但DKK-1水平与年龄、性别、肺癌病理组织类型无关,与TNM分期(r=0.37,P<0.001)、有无淋巴结转移(r=0.52,P<0.001)和远处转移(r=0.62,P=0.001)显著相关;血清DKK-1诊断肺癌的总敏感度为68.4%,特异度为92.2%,准确性为82.1%,阳性预测值为90.6%,阴性预测值为72.5%;血清DKK-1诊断小细胞性肺癌的敏感度和准确性稍高于非小细胞性肺癌(70.7%vs 69.5%,85.6%vs 80.7%).结论 DKK-1可作为一项肺癌血清学标志,适用于肺癌的辅助诊断和病理分期.TR-IFMA检测血清DKK-1方法准确可靠,且为肺癌的DKK-1定量检测提供了技术平台.     

肺癌细胞株中发现一种细胞周期素A2的异常剪接体

目的检测细胞周期素(cyclinA1和cyclinA2)在4种肿瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用RT PCR和DNA测序技术观察cyclinA1和cyclinA2的基因表达并进行序列分析。结果cyclinA1在4种肿瘤细胞中均未检测到表达,而cyclinA2在4种肿瘤细胞中均有表达;在肺癌细胞株(LTEP a2)细胞中,发现一种cyclinA2异常的剪接体,其保留了第四内含子,而缺失了第五外显子,其序列编码蛋白质也发生了突变,只保留了5′端194氨基酸。结论细胞周期素表达与肿瘤发生有一定相关性,LTEP a2细胞中存在细胞周期素A2异常表达,其机制与作用有待进一步的研究。